Что такое трепонемные тесты
Как и при нетрепонемных тестах при проведении трепонемных тестов используется иммунологическая реакция антиген-антитела.Но в качестве антигенов применяются трепонемные антигены — либо интактные трепонемы либо очищенные и ультраозвученные трепонемы либо рекомбинантные антигены.Для проведения и обнаружения результатов реакции антиген-антитела используют более сложные и дорогие различные методы.Наиболее
часто используются следующие трепонемные тесты.
- Реакция иммунофлюоресценции (РИФ -FTA) в различный модификациях
- Реакция пассивной агглютинации (РПГА — TPHA)
- Иммуноферментный анализ (ИФА -EIA) в том числе рекомбинатный ИФА
- Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)
- Иммуноблотинг
Трепонемные тесты являются подтверждающими сифилис тестами,однако в небольшом проценте при их проведении могут встречаться ложноположительные результаты.Трепонемные тесты применяются только для диагностики сифилиса и не используются для проведения контроля излеченности. |
Когда нужно сдавать анализ
Поскольку сифилис является инфекционным заболеванием, передаваться он может различными путями, включая половым, от матери к ребенку и т. д. Особенно остро риску заразиться подвержены работники медицинских организаций — акушеры-гинекологи, стоматологи и хирурги.
Основные показания для обследования на сифилис:
- Исследование новорожденных с целью выявления врожденного заболевания при наличии определенных рисков, например, при установленном диагнозе матери.
- Скрининг пациентов, находящихся в стационаре, доноров, медработников, беременных (обязательно при постановке на учет), работников детских учреждений, общепитов и торговли.
- Плановое обследование лиц, которые имели или имеют любые контакты с лицами, зараженными сифилисом.
- Контроль эффективности проводимой терапии на любых этапах лечения.
- Обследование лиц, которые имеют симптоматику, характерную для сифилиса.
Для чего нужен тест?
Анализ на антитела, или иммуноглобулины, является дополнительным диагностическим методом, позволяющим установить:
- болен ли человек в настоящее время или уже перенес инфекцию;
- наличие в организме Sars-CoV-2 при отсутствии каких-либо симптомов или на фоне имеющихся признаков простуды;
- есть ли иммунитет к Covid-19.
Антитела представляют собой специфические белки, синтезируемые организмом в ответ на попадание чужеродных агентов — микробов, бактерий и вирусов. При большинстве уже известных инфекций первыми продуцируются антитела IqM, которые активно включаются в борьбу с патогеном. Их обнаружение в крови означает, что человек болеет в настоящий момент. Спустя несколько суток от заражения появляются иммуноглобулины типа IqG, посредством которых иммунная система «запоминает» вражеские молекулы на случай повторной встречи.
Коронавирусы, и в том числе новый штамм Sars-CoV-2, не всегда ведут себя так же. У инфицированных людей нередко обнаруживаются оба вида антител практически одновременно. Более того, белки типа G могут наблюдаться даже раньше, чем иммуноглобулины М. Особенность Covid-19 состоит еще и в том, что при опускании инфекции в нижние отделы дыхательных путей ПЦР-тест, который делают для ее выявления, часто дает отрицательный результат.
Именно непредсказуемость циркуляции коронавируса обуславливает необходимость комплексной диагностики. Наиболее информативным будет результат двух тестов — ПЦР и на антитела. Они позволят не только установить факт наличия инфекции, но и определить ее стадию, а также проверить, заразен ли в данный момент человек для окружающих. Итоги теста на иммуноглобулины представляются в наполовину количественном виде: в бланке указывается «коэффициент позитивности» — цифра, характеризующая стадию болезни. Она показывает, прогрессирует инфекция или уже проходит.
Что говорят специалисты?
Тест на антитела может показать, сталкивался ли человек с коронавирусом, даже если симптомов COVID-19 у него не было. Если антитела обнаружены, значит, организм среагировал на встреченный вирус. Они могут сохраняться, даже если самого вируса в организме уже нет. Этот тест говорит только о том, что произошел некий иммунный ответ. Таким образом, выявление антител в крови является информативным свидетельством текущего или прошлого инфекционного процесса и помогает выявить стадию развития инфекции.
Обнаружение IgM указывает на недавнее инфицирование SARS-CoV-2. Они появляются непосредственно после контакта с носителем вируса, на третий-четвертый день.
Через семь-десять дней они уже точно присутствуют в крови. То есть наличие иммуноглобулина М — это показатель того, что вы болеете прямо сейчас. С клиническими проявлениями или без них. Это свежие антитела. Общий период вероятного выявления антител класса M не превышает двух месяцев. В течение этого времени IgM антитела постепенно полностью сменяются на IgG. Последние начинают формироваться в среднем на 21-й день. Если еще есть IgM, и уже появились иммуноглобулины класса G, то это означает позднюю инфекцию. Просто IgM еще не сошли на нет. Когда в крови выявляются только IgG, это говорит о том, что пациент выздоровел, и у него сформировался иммунитет к SARS-CoV-2. Если уровень IgG достаточно высок, то можно стать донором иммунокомпетентной плазмы. Например, IgG больше 40, а IgM больше 1,5, либо IgG больше 80, а IgM равно нулю.
Группы риска
Обычно проходить проверку на заражение сифилисом всех подряд не посылают. Существует целый перечень групп риска, кому потребуется отправиться на диагностику, как правило это те, кто имел незащищенный половой контакт с незнакомым сексуальным партнером.
Кроме этого выделяются несколько категорий, которым необходимо пройти исследование:
- донорам крови и органов;
- беременным или тем, кто планирует беременность;
- в качестве подготовительного этапа перед хирургическим вмешательством;
- работникам с повышенной вероятностью инфицирования.
В последнем случае правило распространяется на медицинский персонал, которому приходится ежедневно сталкиваться с инфицированными больными.
Отдельно рассматриваются ситуации, когда проверка необходима новорожденным вследствие того, что мать в момент вынашивания плода была инфицированной. Анализ позволит исключить риски возможного врожденного сифилиса.
Но чаще всего диагностика необходима при следующих симптомах:
- язвы в области половых органов;
- выделения из гениталий;
- сыпь на коже;
- увеличенные лимфатические узлы;
- костные боли.
При фиксации хотя бы нескольких признаков из перечисленных выше, целесообразно обратиться за квалифицированной консультацией к узкопрофильному врачу.
ИФА — иммуноферментный анализ и РПГА — реакция пассивной гемагглютинации
Иммуноферментный анализ (ИФА) и реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) – новые высокочувствительные и высокоспецифичные, удобные в постановке (с возможностью автоматизации), хорошо воспроизводимые, недорогие методы серологической диагностики сифилиса.
ИФА по механизму реакции, чувствительности и специфичности близок к РИФ. В обеих реакциях принимают участие одни и те же антитела. При ИФА для визуализации реакции антиген-антитело используют реакцию фермента (щелочная фосфатаза или пероксидаза хрена) с субстратом, который при этом меняет свою окраску. Интенсивность окраски определяет позитивность реакции (от + до ++++). Благодаря автоматизации, этот тест можно применять для скрининга на сифилис больших групп обследуемых: беременных, доноров, больных психоневрологических и кардиологических стационаров и др. Возможна постановка ИФА с ликвором. В настоящее время планируется замена комплекса КСР на сочетание РМП и ИФА.
Результаты ИФА (как и РИФ) становятся положительными в первые дни первичного периода или в конце инкубации и остаются положительными во всех периодах.
При постановке ИФА возможно выявление суммарных антител и дифференцированное определение трепонемоспецифических IgM и IgG. IgM появляются в крови больных лишь в первые недели и месяцы болезни, а затем – исчезают. Поэтому, их выявление при ИФА свидетельствует о наличии ранних нелеченых форм сифилиса, раннего врожденного сифилиса, реинфекции. При выявлении IgG принципиальным является их количество, что отражается с помощью коэффициента позитивности (порядок величин этого показателя варьирует при применении разных тест-систем).
При РПГА в качестве антигена используются заформалиненные эритроциты барана, покрытые антигенами патогенных бледных трепонем. При добавлении к этим эритроцитам сыворотки, содержащей специфические антитела, происходит их агглютинация.
Результаты РПГА оценивают как реактивные, слабореактивные и нереактивные.
Помимо качественного исследования, во всех тест-системах предусмотрен количественный анализ с определением титра. Как и ИФА, РПГА проста в исполнении, не требует высокой квалификации персонала и специального оборудования, возможна ее автоматизация.
РПГА становится положительной уже в инкубационном периоде и может оставаться таковой спустя много лет после выздоровления (не может использоваться для контроля излеченности). По чувствительности и специфичности РПГА не уступает, а при поздних формах и врожденном сифилисе даже превосходит РИФ и РИБТ.
ЛПР при постановке ИФА и РПГА бывают редко и возможны при трепонематозах (фрамбезия, беджель, пинта), коллагенозах, циррозе печени, лимфосаркоме, инфекционном мононуклеозе, лепре, а также у беременных. Ложноотрицательные результаты возможны у ВИЧ-инфицированных пациентов.
Разрабатываются новые высокоспецифичные методы серологической диагностики сифилиса, такие как иммуноблотинг, IgM-серология и др.
Август Пауль фон Вассерман (Wassermann, August von) (1866–1925), немецкий микробиолог и иммунолог.
Что означают результаты теста?
В норме результат должен быть отрицательным. Положительный результат говорит об инфицировании, текущем или перенесенном в прошлом заболевании, так как в тесте определяется наличие антител к бледной трепонеме. Отрицательное значение также не гарантирует отсутствия заболевания, так как антитела не вырабатываются первые две недели после инфицирования. В случае подозрения на сифилитическую инфекцию необходимо применять нетрепонемные и другие трепонемные тесты, а также целесообразно повторить анализ спустя 14 — 21 день.
Тест не используется для контроля эффективности терапии, так как антитела могут годами сохраняться в крови больного, перенесшего сифилитическую инфекцию ранее, лечившегося и здорового в настоящий момент.
Тест может давать ложноположительный результат: при невенерических трепонематозах и спирохетозах; а также у больных с аутоиммунными заболеваниями, лепрой, онкологическими заболеваниями, эндокринной патологией и при некоторых других заболеваниях.
РМП — реакция микропреципитации, микрореакция
Реакция микропреципитации (РМП), микрореакция, экспресс-метод диагностики сифилиса представляет собой реакцию преципитации на стекле. Как и в реакции Вассермана, используется кардиолипиновый антиген. Качественная оценка реакции производится по объему выпавшего осадка, величине хлопьев и так же обозначается в «плюсах». Для получения результата необходимо всего 10-40 минут. РМП несколько превосходит RW по чувствительности, но уступает по специфичности. За рубежом применяются аналоги РМП – RPR и VDRL. Реакция Вассермана и реакция микропреципитации в совокупности образуют комплекс классических серологических реакций (КСР). КСР становятся положительными в середине первичного периода (его деление на серонегативный и серопозитивный как раз и определяется по КСР), во вторичном периоде КСР положительны у 98-100% больных, а при третичном – лишь у 60-70%. То есть, по мере увеличения давности заболевания позитивность КСР постепенно снижается.
Достоинства классических серологических реакций:
1) Дешевизна, простота и быстрота постановки. Особенно это характерно для реакции микропреципитации: РМП в настоящее время – главный скрининговый (отборочный) метод; 2) Нетрепонемные тесты удобно использовать для контроля излеченности сифилиса.
Недостатки классических серологических реакций: 1) Субъективность оценки результатов реакций («на глаз»); 2) Малая чувствительность при поздних формах сифилиса; 3) Главный недостаток нетрепонемных тестов – недостаточная специфичность. При их проведении часто отмечаются ложноположительные реакции (ЛПР).
Ложноположительные реакции могут быть обусловлены перекрестной реактивностью между бледной спирохетой и другими микробами, нарушениями липидного и белкового обмена, нестабильностью клеточных мембран, образованием аутоантител.
При анализе на сифилис ложноположительные реакции отмечаются при острых (малярия, инфекционный мононуклеоз и др.) и хронических (туберкулез, лепра, гепатит, боррелиоз и др.) инфекциях, инфаркте миокарда, циррозе печени, коллагенозах (особенно – при СКВ), онкопатологии, вакцинации, употреблении наркотиков, злоупотреблении алкоголем и жирной пищей.
Ложноположительными могут быть КСР в последние недели беременности, после родов, а у некоторых женщин и во время mensis. Ложноотрицательные результаты КСР могут быть связаны с ВИЧ-инфекцией.
Наименее надежным методом диагностики сифилиса является реакция микропреципитации (РМП), которую нельзя применять как единственный метод для обследования доноров, беременных. При установлении диагноза сифилиса также обязательно подтверждение результатов РМП трепонемными тестами.
Трепонемные тесты на сифилис служат для подтверждения результатов нетрепонемных тестов (особенно необходимо при диагностике скрытых форм), а также для выявления сифилиса на ранних стадиях, когда КСР отрицательные.
Ложные результаты
Выбор тестов и интерпретация их результатов зависят от различных факторов, в том числе от возможного инфицирования и результатов тестов, а также от того, повторное ли это заражение. В лабораторной диагностике всегда сохраняется риск погрешности и на него приходится около 5% от общего числа диагностируемых случаев.
При фиксации ложноположительного результата, следует учитывать, что на результативность могут влиять различные диффузные болезни соединительной ткани. Даже классический артрит ревматоидного типа может повлиять на достоверность полученной информации. То же самое касается системной красной волчанки.
Мешают диагностике также сахарный диабет или недавно проведенная вакцинация пациента, ряд инфекционных болезней тяжелого течения вроде мононуклеоза или туберкулеза. Вирусный гепатит или болезни сердечной мышцы также способны повлиять на качество предоставляемых результатов, особенно это касается эндокардита.
Люди, которые страдают алкоголизмом на самых запущенных стадиях, либо принимающие различные наркотики, тоже подвержены риску получить недостоверный результат.
Намного реже встречаются ситуации, где фигурируют ложноотрицательные значения. Причиной, вероятнее всего, являются слишком ранние сроки диагностики. Иногда, такой результат прослеживается у пациентов с поздней стадией сифилиса, когда выработка антител практически подавлена.
Что такое микрореакция преципитации на сифилис
Микрореакция преципитации — тест, который считается нетрепонемным. Основан он на иммунологической реакции «антиген-инатитело». С ее помощью можно определить в крови антитела реагинового характера, вырабатываемые организмом против липидов, которые были повреждены возбудителем сифилиса — трепонемой.
Подобные антитела вырабатываются против определенного ряда заболеваний, вызывающих разрушение тканей. Соответственно, анализ крови МР на сифилис нельзя назвать подтверждающим факт наличия инфекции. В медицине его считают отборочным.
Разновидности микрореакций
Кровь на сифилис методом МРП можно исследовать несколькими способами:
- Тест микроскопический. Оценка результата происходит путем световой микроскопии, которую используются для подсчета преципитатов. Если есть подозрение на наличие нейросифилиса, исследованию подвергают также спинномозговую жидкость.
- Тест макроскопический. Оценка реакции происходит невооруженным глазом. Тут для подсчета используются специальные визуализирующие агенты, которые вовлекаются в комплекс антиген-антитело.
Количественная МРП ИФА на сифилис проводится путем разведения сыворотки крови.
Профилактика
Профилактические мероприятия заключаются в соблюдении личной гигиены, использовании отдельного белья и посуды, индивидуальных косметических средств. Рекомендуется сразу после незащищенного полового акта обработать раствором хлоргексидина или альбуцида половые органы или другие части тела, с которыми произошел контакт. Эти средства необходимо иметь в домашней аптечке.
С профилактической целью обследуют:
- Доноров,
- Беременных женщин,
- Работников детских садов, школ, общепита и лечебно-профилактических учреждений,
- Больных, поступающих на стационарное лечение.
Современная противомикробная терапия позволяет избавиться от патологии и делает прогноз заболевания благоприятным. Только врач-дерматовенеролог сможет подобрать правильное и достаточное лечение, соответствующее стадии болезни. Заниматься самолечением сифилиса категорически запрещено. Не до конца излеченная патология может перейти в хроническую форму. Такой больной опасен для окружающих лиц.
Сифилис – социальный недуг, к лечению которого нужно подходить серьезно и ответственно.
Сифилис, антитела к Treponema.pallidum lgM, lgG кач.
Сифилис – инфекционное заболевание, вызываемое бледной трепонемой (Treponema pallidum), передающееся в основном половым путем, склонное к хроническому течению и поражающее большинство органов и систем организма. Сифилис характеризуется медленным прогрессирующим течением. На поздних стадиях он может приводить к тяжелым поражениям нервной системы и внутренних органов.
Клиническая картина при сифилисе
Антитела класса IgM
Антитела класса IgG
Показания
- Подготовка к беременности.
- Диагностика врождённого сифилиса.
- Сомнительные сексуальные связи.
- Подготовка к оперативному вмешательству.
- Донорство (заготовка и переливание крови и её компонентов).
- В комплексе лабораторного подтверждения диагноза сифилиса.
Интерпретация результатов
Положительный результат:
сифилис в разных клинических стадиях. У пациентов прошедших курс лечения может сохраняться положительный результат, так называемый «серологический шрам».
- отсутствие инфицирования;
- ранний первичный сифилис.
исследования антител к Treponemapallidum, IgG+IgM означает, что наличие антител к возбудителю сифилиса под вопросом. При сомнительном результате может быть полезным повторное исследование через 10-14 дней. Результат интерпретируют в комплексе с клинической ситуацией, анамнезом и результатами других исследований.
Особенности исследования
В зависимости от выбранного метода анализа, будет колебаться его ценовая политика. При скрининговом обследовании в диспансере цена обычно определяется стоимостью шприца для забора биологического материала. Однако современные исследования в частных центрах, либо оценка состояния больного посредством инновационных техник, может оказаться на порядок дороже. Поэтому точно узнавать, сколько стоит манипуляция, лучше заблаговременно.
При определении возбудителя, а также стадии развития поражения в реагиновом и трепонемном тесте выявление антител будет эффективным только после хотя бы трех – пяти недель после незащищенного полового акта.
В противном случае невозможно получение четкой клинической картины. Это связано со сроками формирования сифилитической язвы, в месте проникновения инфекции в организм.
Поэтому использование экспресс-теста в более ранние сроки для предварительной оценки закончится лишь пустой тратой денег.
Кровь для анализа забирается из большой вены в зоне локтевого сгиба.
Иногда на месте укола потом образуется синяк, либо в процессе сбора материала человек испытывает ощущение, похожее на жжение. Но подобные явления – вполне нормальная реакция организма на внешнее вмешательство.
Согласно протоколу, потерпевший сдает кровь для анализа натощак. Это означает, что последний прием пищи следует проводить хотя бы за восемь часов до процедуры, чтобы избежать попадания в биологическую жидкость растворенных жировых компонентов принятой пищи.
Чтобы не переделывать все заново из-за собственной невнимательности, подготовка должна проводиться особенно тщательно.
Устойчивость возбудителей во внешней среде
- Бледная трепонема устойчива к низким температурам. До одного года выдерживает замораживание. Хранятся патогенные штаммы возбудителей в бескислородной среде при низких температурах (20 — 70°С) или высушенными из замороженного состояния.
- Трепонемы сохраняют свою вирулентность на предметах окружающей среды до момента высыхания. При температуре до 42°С активность бактерий вначале повышается, а затем они погибают. При нагревании до 60°С трепонемы сохраняют свою активность в течение 15 минут. Более 3-х суток возбудители сифилиса сохраняют свои патогенные свойства в трупном материале.
- Вне организма человека бактерии быстро погибают. При температуре 100°С они погибают мгновенно. Бледные трепонемы чувствительны к дезинфицирующим средствам и некоторым антибиотикам.
Рис. 2. Для выявления бактерий применяется реакция иммунофлюоресценции.
Положительные серореакции при отсутствии симптомов сифилиса
Это самый сложный вопрос в сифилидологии — положительные серореакции на сифилис
при отсутствии клинических симптомов.Различают пять
ситуацийСкрытый сифилис
- трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные
- нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) — положительные (хотя при позднем скрытом
сифилисе — давность заболевания более 2 лет -могут быть отрицательные) - нет документированного свидетельства о полученном адекватном лечении
сифилиса
Серопозитивность после лечения сифилиса
- трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные или
отрицательные — значения не имеет - нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) — положительные,отмечается снижение
титров в течении года в 4 и более раза - есть документированное свидетельство о полученном адекватном лечении
сифилиса
Серорезистентность после лечения сифилиса
- трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные или
отрицательные — значения не имеет - нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) — положительные,отмечается их
стабильность или снижение титров в течении года менее чем в 4 раза - есть документированное свидетельство о полученном адекватном лечении
сифилиса
Излеченный сифилис
- трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные
- нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) — отрицательные
- есть документированное свидетельство о полученном адекватном лечении
сифилиса
Ложноположительные
реакции на сифилис
- трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) отрицательные
- нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) — положительные
- наличие документированных свидетельств о полученном адекватном лечении
сифилиса не имеет значения
Рекомендации:Выяснение причин
ложноположительных реакций (АФС,коллагенозы,онкология,туберкулез,беременность
и.т.д.)
Подробное описание исследования
Сифилис представляет собой инфекционное заболевание, вызываемое бледной трепонемой (Treponema pallidum). Передача инфекции осуществляется преимущественно посредством полового контакта без применения барьерных средств контрацепции. Тем не менее, возможно заражение бледной трепонемой контактно-бытовым путем при несоблюдении правил личной гигиены, а также передача возбудителя от матери к ребенку в родах, при грудном вскармливании. Сифилис способен поражать любые органы и системы. В отсутствие своевременного лечения заболевание приобретает хроническое течение. Первично на месте контакта с источником заражения образуется твердый шанкр — безболезненная язва с небольшим количеством прозрачного содержимого на поверхности. Часто организм реагирует на внедрение возбудителя воспалением лимфатических узлов, расположенных рядом с местом поражения. В течение нескольких недель на месте твердого шанкра образуется рубец. Однако болезнь не отступает, и через некоторое время зараженный человек отмечает появление специфической сыпи на туловище — появление ярко-розовых пятен небольшого цвета (розеолезная сыпь). Эта стадия называется вторичным сифилисом. Заболевание склонно к периодическим обострениям с изменениями характера высыпаний. Третичный сифилис является результатом несвоевременной диагностики и лечения этого заболевания. Наряду с формированием узлов и бугорков на коже, которые называют гуммы, склонных к изъязвлению и рубцеванию, наблюдается поражение внутренних органов. Диагностику и лечение сифилиса осуществляет врач-дерматовенеролог. Одним из важнейших диагностических исследований служит выявление в крови иммуноглобулинов М и Gк бледной трепонеме. Данный тест является первичным скрининговым анализом для обнаружения сифилиса. При получении положительного результата необходима дальнейшая диагностика для выявления активности заболевания.