Пцр (полимеразная цепная реакция): что это, показания к анализу, виды тестов и методы диагностики, преимущества и недостатки

Как часто сдавать ПЦР анализ на ЗППП если ничего не беспокоит?

Обследоваться на ЗППП можно хоть каждый день — по желанию. Все зависит от наличия свободного времени, денег и уровня вашей тревожности. Есть только один нюанс. Метод ПЦР — очень точный анализ. С его помощью можно обнаружить в недрах организма считанные копии вируса или бактерии. И ни один честный врач не скажет вам наверняка, насколько эта находка опасна для здоровья, и каков достоверный риск осложнений. Поэтому решите для себя заранее, сможете ли вы спокойно жить дальше или будете лечить результаты анализа даже в тех случаях, когда до похода в клинику у вас не было никаких проблем с интимным здоровьем.

Иначе обстоят дела с обследованием на ЗППП в группе риска — у людей с рискованным сексуальным поведением и беременных женщин. Им необходимо периодически сдавать анализы на половые инфекции, даже если нет никаких жалоб на здоровье. Сексуальным экстремалам профилактическое обследование нужно, чтобы выявить факт инфицирования еще до появления симптомов и как можно раньше принять меры для защиты своих половых партнеров от заражения. Беременным женщинам диагностика ЗППП необходима, потому что многие мамины инфекции передаются будущему малышу. Даже если нет симптомов у женщины, последствия для ребенка могут быть тяжелыми.

Суть метода полимеразной реакции

У каждого живого организма имеется свой уникальный набор хромосом. Ни у одного существа он не повторяется, но все хромосомы образованы ДНК — дезоксирибонуклеиновой кислотой. ДНК состоит из множества мельчайших молекул, называемых нуклеотидами.

Последовательности цепочек этих молекул образуют гены. Гены же отвечают за кодировку синтеза огромного количества белков, таких, как глобулин, коллаген и т. д.

Последовательность нуклеотидов у каждого организма уникальна, за исключением схожих участков ДНК, отвечающих за относительное однообразие в пределах вида организма. Методом ПЦР находят фрагменты нуклеиновой кислоты и определяют, какому виду микроорганизма они принадлежат.

Но анализ ДНК небольшого количества микробов будет малоинформативен. Чтобы иметь возможность выявить и исследовать определенные видовые закономерности, необходимо увеличить количество нуклеотидов во много сотен раз. Для этого также используют методику ПЦР.

Чтобы получить достаточное количество материала для проведения исследования, к ДНК микроорганизма добавляют определенные нуклеотиды, а также ДНК-полимеразу. Этот фермент обеспечивает многократное копирование интересующего исследователей участка.

Катализатором (веществом, запускающим реакцию) процесса служат нити РНК, крепящиеся к гену, который и необходимо изучить. За несколько часов анализа всего из одного нуклеотида можно получить достаточное количество материала для исследований.

Бактериоскопический метод (мазок на инфекции)

Мазок (бактериоскопический метод) — самый распространенный метод лабораторной диагностики.

При бактериоскопическом методе анализ выполняется с помощью светового микроскопа. Исследуемый материал вносят в каплю физраствора, тщательно размешивают и распределяют по стеклу. Должно наступить хорошее окрашивание частей клеток и бактерий в разные цвета, чтобы оценить состав выделений из уретры, влагалища и шейки матки.

Анализ соскоба из уретры или влагалища в гинекологии позволяет определить: — количество лейкоцитов (их повышение говорит об инфекции, но у здоровых женщин небольшое число лейкоцитов присутствует во флоре); — количество эритроцитов (основной показатель воспалительного процесса при повышенном количестве); -состав флоры (у женщин он зависит от менструального цикла, но активность клеток говорит о нарушении микрофлоры); — наличие трихомонады, гонококков, грибка – основная цель для выявления возбудителя инфекций; — наличие лактобацилл (их отсутствие говорит о нарушенной микрофлоре). Также мазок определяет степень чистоты влагалища женщины: 1 и 2 степень – характерна для здоровой флоры, а 3 и 4 – выявляет кольпит, воспаление.

Преимущества данного метода состоят в простоте, доступности и быстроте получения результатов (30 — 60 мин и менее). Однако чувствительность данного метода ограничена (около 105 бактерий в 1 мл). Практически не определяются в урогенитальном мазке вирусы, хламидии, микоплазмы и уреаплазмы, и одних только результатов мазка часто бывает недостаточно для постановки диагноза. Для диагностики этих инфекций рекомендуется использовать методы ПЦР-диагностики и ИФА-исследований. Результаты мазка обычно можно использовать как ориентировочные.

Перед сдачей мазка лучше воздержаться от мочеиспускания.

Тестирование на наличие антител к коронавирусу COVID-19

Аналогично другим вирусным инфекциям, Коронавирус стимулирует гуморальный и клеточный иммунный ответ (IgM и IgG) . После вторжения вируса в организм, в крови больного начинают появляться сначала иммуноглобулин класса M (IgM), позднее – иммуноглобулин класса G (IgG), после чего активируется иммунитет и клетки иммунной системы атакуют собственные клетки, зараженные вирусом.

Для получения ответа на вопрос инфицирован ли пациент в данный момент, подвергался ли человек воздействию вируса  и развился ли у него иммунный ответ, необходимо применение тестов на выявление антител (Ig G, Ig M, Ig A) к конкретному вирусу. В основе таких тестов лежат методы иммуноферментного анализа (ИФА), иммунохроматографии (ИХА) и их аналогов.

Антитела класса М появляются в острой фазе заболевания и снижаются после выздоровления. Антитела  класса  G  появляются на 7 сутки от начала заболевания  и держатся длительное время, продолжительность этого времени еще неизвестна.

По наличию и уровню IgM антител в крови можно судить о текущей или недавно перенесенной инфекции. Антитела IgM появляются уже через несколько дней после первых проявлений болезни (на 2-3 сутки от начала заболевания), их концентрация достигает максимума на 7-10 сутки от начала заболевания и определяются в крови 1- 1,5 месяца. IgM первым вырабатывается среди всех иммуноглобулинов при контакте организма с инфекцией, поэтому их называют иммуноглобулинами первичного иммунного ответа. Их присутствие в крови свидетельствует об острой стадии инфекционного процесса.

Специфические IgG антитела обычно присутствуют в крови длительное время и после выздоровления и могут выполнять защитную роль. Поэтому исследование уровня специфических IgG к SARS-CoV-2 может помочь для прогноза вероятного наличия иммунной защиты в результате перенесенной инфекции. Таким образом, определение IgG не используется при ранней диагностике инфекции – он обнаруживается в крови через две недели от начала заболевания, пик его определяется через месяц и продолжительность определения его пока неизвестна.  IgG определяет появление иммунитета в дальнейшем.

Для первичного прохождения исследования на антитела, рекомендуется выявление в крови одновременно IgM и IgG антител.

У нас в клинике вы можете пройти экспресс-тестирование за 15 минут методом ИХА или сдать кровь на анализ на антитела методом ИФА. Мы работаем только с аккредитованными Роспотребнадзором лабораториями. 

Что такое ПЦР-тест

Аббревиатура «ПЦР» расшифровывается как полимеразная цепная реакция. Это способ молекулярно-генетического распознавания, который помогает обнаружить в человеческом организме всевозможные инфекции. В основе метода лежит увеличение небольших концентраций фрагментов ДНК и РНК во много раз.

Суть исследования

Анализ проводится на современном технологическом оборудовании. В особый прибор – амплификатор – помещается частица, содержащая РНК или ДНК. Эти элементы столь малы, что обнаружить в них инфекцию достаточно сложно. Для этого применяют тест ПЦР.

В аппарат помещают особенные компоненты – праймеры, которые увеличивают количество РНК и ДНК цепочек. Когда цепочек становится достаточно много, машина начинает их распознавать – «видеть». Если присутствует хотя бы малейшая частица РНК вируса, создается множество клонов инфекции. Таким образом выясняется, есть ли болезнь в организме или нет.

Для определения коронавируса существует специальный праймер. Процесс роста количества копий цепочек происходит очень быстро. Поэтому реакция названа цепной.

Если перед сдачей ПЦР теста правильно подготовиться к анализу, результат практически во всех случаях достаточно точен – 98-99%.

Кому показана процедура

По правилам ПЦР теста анализ рекомендован людям с подозрениями на инфекцию, находящимся в контакте с болеющими и имеющими симптомы коронавируса. Также процедуру проводят пациентам с гриппом, ОРВИ, бронхитом, пневмонией.

По действующим требованиям выздоровевшего человека выписывают из стационара, проведя не менее 2 тестов на COVID-19 с отрицательным результатом.

В отдельных случаях тесты на коронавирус могут показывать ложный положительный или ложный отрицательный результат. Тогда проводится повторный анализ.

Когда необходимо пройти тестирование на гепатит С методом ПЦР

ПЦР проводят при обнаружении антител к вирусу гепатита или подозрении на гепатит С. Иногда бывает и так, что человек уже является носителем гепатита или даже имеет активную форму этой болезни. Пациенты с хроническим гепатитом С, вероятно, будут иметь значительные изменения в своем физическом и психическом состоянии, чаще всего проявляющиеся как усталость и депрессия, а сам вирус гепатита С может влиять на мозговую функцию. Существует вероятность прямого инфицирования центральной нервной системы.

Вирус передается от одного человека другому, главным образом парентеральным путем. Основными путями передачи являются:

• потребление инъекционных наркотиков, использование нестерильных шприцев;
• переливание крови и инъекции;
• клинико-диагностические процедуры (профессиональные воздействия, такие как операции, зондирование, некоторые виды обследований);
• татуаж;
• распространение инфекции половым путем.

Передача профессиональным, перинатальным и половым путем менее активна по сравнению с передачей через кровь. Следовательно, эти способы не считаются основными источниками новой инфекции ВГС, независимо от населения или географического района.

Скрининг инфекции имеет несколько потенциальных преимуществ. При раннем выявлении инфекции антивирусное лечение может быть предложено в ходе заболевания, которое более эффективно на ранней, чем на поздней стадии.

Кроме того, скорейшее выявление вместе с рекомендациями и модификациями образа жизни может снизить риск передачи инфекции другим людям. Оптимальным подходом к скринингу является проверка лиц, имеющих факторы риска. Самым частым случаем, когда передается вирус, является переливание крови.

Риск инфицирования реципиентов при переливании крови слишком высок. До начала 21 века переливание крови приводило к высокому риску заражения, приблизительно 15-20%. В 20 веке 90% случаев посттрансфузионного гепатита были вызваны теми же вирусами.

Переход на взятие крови у добровольцев вместо платных доноров значительно снизил риск развития посттрансфузионного гепатита (до 10%). Скрининг крови дополнительно уменьшал возможность посттрансфузионного гепатита С, примерно в 10 000 раз – к нынешней ставке 1 на миллион переливаний. Несколько случаев, которые все еще происходят, связаны с тем, что недавно инфицированные люди сдавали кровь прежде, чем они вырабатывали антитела (период окна) к вирусу, что может занять до 6-8 недель.

Преимущества и недостатки

Среди плюсом методики полимеразной цепной реакции:

• Высокая точность. Способ позволяет выявить конкретного инфекционного возбудителя, определить давность его влияния на организм, стадию патологического процесса. Также выявить генетические аномалии, если стоит такая цель.
• Универсальность. Анализ ПЦР дает возможность обнаружить любой инфекционный агент: будь то вирус, грибок или бактерия.
• Высокая скорость, оперативность. Результаты доступны в тот же или, максимум, на следующий день.
• Возможность изучения любого материала. Для оценки состояния пациента годятся моча, кровь, соскобы со слизистых. Теоретически, они взаимозаменяемы. Вопрос только в применяемой методике диагностики.

Минус один — относительно высокая стоимость. Полимеразная цепная реакция дороже серологических тестов. Но большая цена с лихвой компенсируется точностью результатов.

ПЦР диагностика — это высокоточный метод выявления инфекционных заболеваний, генетических аномалий и прочих процессов. Применяется в том числе в криминалистике, для установления родства двух и более людей.

Отличается высокой скоростью проведения. Назначается по усмотрению врача.

Как сдать анализ ПЦР правильно: подготовка

Чтобы понять, как именно следует подготовиться к предстоящему анализу ПЦР, пациент должен обязательно уточнить у своего врача, какой именно биологический материал планируется взять. От этого непосредственно зависит подготовка.

• Выделения из половых органов, мазок из шейки матки или мочеиспускательного канала, моча – посредством исследования данных вариантов материала методом ПЦР эффективно диагностируются инфекции половых органов.
• Вирусный гепатит C, ВИЧ инфекция требуют взятие крови на анализ ПЦР.
• С помощью мазка из зева можно подтвердить или опровергнуть факт наличия инфекционного мононуклеоза.

А как обнаружить скрытые инфекции у мужчин и женщин?

По настоящему скрытые инфекции — это редкость. Гораздо чаще встречаются не скрытые, а забытые инфекции: когда вроде что-то было, но само прошло, хотя инфекция никуда не делась, а только перешла в вялотекущую форму.

Дело в том, что многие половые инфекции имеют волнообразное течение. Первые симптомы быстро пропадают без лечения. Затем наступает так называемая «скрытая» стадия: субъективные жалобы отсутствуют, человек считает, что выздоровел, но инфекция медленно развивается, вызывая хроническое воспаление. Спустя какое-то время симптомы болезни обычно возвращаются, только уже вместе с осложнениями. Поэтому любые проблемы в интимной сфере решайте безотлагательно.

Как расшифровать ПЦР анализ

Проведение ПЦР исследования позволяет не просто установить тип инфекции, присутствующий в организме больного, но и оценить его с количественной точки зрения (количество микробов). Расшифровка результатов количественного анализа ПЦР играет важную роль в обнаружении и проверке эффективности лечения большого числа хронических заболеваний, скажем гепатита C.

Результатом анализа ПЦР могут стать положительный и отрицательный ответы.

• Отрицательный результат. Следы инфекции не были выявлены в биологическом материале, который являлся объектом исследования в процессе анализа ПЦР. Как правило, на основании отрицательного результата можно полагать, что в организме действительно отсутствует инфекция.
• Положительный результат. Такой результат анализа ПЦР свидетельствует о том, что следы инфекционного заболевания присутствуют в биологическом материале пациента. Положительный результат анализа ПЦР характеризуется большой степенью точности.

Иногда инфицирование выявляется на фоне полного здоровья и отсутствия признаков заболевания. Некоторые больные считают, что анализ сделан неправильно, но реальная ситуация другая. Если ПЦР показала, что возбудитель в организме есть, значит, он там действительно находится. Просто инфекционные болезни никогда не начинаются сразу после заражения, имея инкубационный период различной продолжительности.Скрытый период может продолжаться очень долго, например, при СПИДе – несколько лет, пока какие-то механизмы не подтолкнут вирусы к размножению. Возбудитель определяется в организме носителей и тех, кто не долечился. Очень часто переходят в скрытую (латентную) форму различные ЗППП. В этом случае может понадобиться дополнительная лабораторная диагностика.

Какие инфекции можно диагностировать методом ПЦР

На диагностику отправляют гинеколог, уролог или дерматолог. Анализ ПЦР дает возможность диагностировать большое число разнообразных инфекций. В эту группу попадают и скрытые, бессимптомные заболевания, находящиеся в инкубационном периоде:

С помощью метода ПЦР можно обнаружить:

• гепатит C, B;
• уреаплазмоз половых органов;
• ИППП – уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез,;
• хламидиоз половых органов и дыхательных путей;
• микоплазмоз половых органов и дыхательных путей;
• бактериальный вагиноз;
• кандидоз половых органов;
• инфекционный мононуклеоз;
• туберкулез;
• сальмонеллез;
• туберкулез (легочные и внелегочные формы);
• листериоз, клещевые энцефалиты, болезнь Лайма;
• цитомегаловирусную, папилломавирусную, герпесную  инфекцию;
• детские заразные болезни, выявляемые при беременности и до зачатия — краснуху, паротит, дифтерию, корь;
• ВИЧ.

При каждом из вышеперечисленных заболеваний, обнаруженным другим методом, желательно делать и ПЦР — исследование. Возбудители многих инфекций имеют несколько типов (штаммов), а более точная диагностика делает лечение эффективнее. Поскольку разные типы возбудителей обладают своими способами передачи инфекции, точное определение возбудителя помогает уберечь от заражения окружающих. Например, гепатитом А можно заразиться через общие предметы и посуду (болезнь грязных рук), а гепатитом С — только через кровь, медицинские инструменты и половые контакты

Это важно для тех, кто находится рядом с больным

Суть метода и когда его назначают

Полимеразная цепная реакция представляет собой способ молекулярной анализа. Частный путь применения ПЦР-диагностики — это выявление всевозможных инфекционных патологий: будь то бактериальные, грибковые или вирусные поражения.

Практический смысл заключается в следующем.

Инфекционные возбудитель в любом случае оставляет в кровеносном русле пациента, на слизистых оболочках часть своего генетического материала.

Врачи берут фрагмент биологической жидкости или иную пробу, после чего с помощью специальных ферментов удлиняют, удваивают существующую ДНК.

И так до тех пор, пока необходимая часть генетического материала не станет достаточно длинной для того, чтобы ее удалось обнаружить с помощью специального детектора.

По результатам можно говорить о развитии того или иного инфекционного поражения, его давности.

ПЦР используется не только для диагностики текущих септических процессов. Есть разные модификации способа. С помощью этого же метода, иммунологической разновидности, можно определить антитела к тому или иному агенту.

Благодаря чему, удается выявить сопротивляемость организма этому конкретному возбудителю, наличие или отсутствие иммунитета. Работа врачей заключается в том, чтобы верно толковать результаты.

С помощью все того же ПЦР можно установить отцовство, определить присутствие наследственных генетических патологий. Это в своем роде уникальная и перспективная методика обследования.

Показаний к назначению анализа полимеразной цепной реакции множество.

Вот лишь некоторые возможные варианты:

• Предполагаемые вирусные инфекции, поражающие печень. Все формы гепатита. На расстройство косвенно указывают такие симптомы: боли в правом боку, нарушения пищеварения, поносы, запоры, тяжесть под ребрами в проекции органа, пожелтение кожи и склер глаз, ощущение горечи во рту, тошнота, рвота, увеличение объемов живота. ПЦР позволяет поставить точку в вопросе. Назначается в первую же очередь.
• Диагностика СПИДа. Определить ВИЧ инфекцию можно несколькими способами. Но полимеразная цепная реакция дает однозначный ответ, практически сразу. Потому именно ПЦР считается предпочтительным вариантом и основной мерой диагностики.
• Венерические инфекции. Обследование проводится в любой момент. В качестве биоматериала забирают мазок со слизистых оболочек уретры.

Методика предоставляет точные результаты. С ее же помощью можно обнаружить ход течения заболевания, давность, наличие иммунитета, сопротивляемость организма.

Проводится параллельно с микробиологическим исследованием или вместо него. Зависит от ситуации.

На венерические инфекции указывают такие симптомы: боли в области половых органов, рези при мочеиспускании, жжение, зуд, выделения гнойного, прозрачного характера с неприятным запахом или без такового, нарушения отхождения урины.

• Герпесвирусные инфекции, папилломатоз. Другими способами определить патологические процессы, ассоциированные с этими возбудителями, не выйдет. Многие из них потенциально опасны. Некоторые штаммы вируса папилломы человека крайне агрессивны, онкогенны. Могут привести к сложным формам рака. Потому так важна ранняя диагностика.
• Злокачественные процессы на начальной стадии. Пока еще симптомов нет. С помощью ПЦР-анализа удается обнаружить аномальные клетки, которые имеют одну, а то и несколько мутаций генетического материала.

Как правило, это случайные находки. Например, при анализе соскоба со слизистых оболочек полости рта заядлого курильщика.

Благодаря такому способу удается обнаружить проблему на ранней стадии, когда как таковой опухоли еще нет. Но предпосылки — представлены в полном объеме.

• Исследование иммунной реакции на того или иного возбудителя. Изучают особые вещества, которые отвечают за инактивацию и сдерживание аномальных агентов, инфекционных структур. Методика отличается от схожего по целям ИФА.
• Обследование на предмет генетических аномалий. В рамках диагностики наследственных патологических процессов. В качестве основного метода.
• Также с помощью ПЦР возможно установление отцовства, родства двух людей. Но это тема для отдельного разговора.

Для исследования забирают биоматериал. Какой именно — зависит от конкретных показаний. Обычно берут мазки со слизистых оболочек полости рта, половых органов, уретры.

В качестве исходного образца изучают мочу, кровь, мокроту, слюну. Есть отдельные условия по подготовке и проведению диагностики полимеразной цепной реакции.

Как подготовиться к ПЦР тесту на коронавирус

Наиболее распространенными вопросами по подготовке к тесту на коронавирус являются следующие:

• Пцр тест – можно ли есть;
• разрешается ли курить и употреблять алкоголь;
• чего нельзя делать перед анализом на коронавирус ни в коем случае;
• что нужно для ПЦР теста, чтобы результат был достоверным.

В подготовке к ПЦР тесту на коронавирус нет ничего сложного. Но существует несколько требований, которые необходимо соблюдать. Ведь от грамотного подхода зависит достоверность полученного результата.

Можно ли есть или пить

Непосредственно перед проведением процедуры по забору биоматериала пить и есть нельзя. ПЦР-тест будет достовернее, если анализы взяты через 3-4 часа после еды.

Вместе с пищей зараженные частицы снимаются с поверхности слизистых оболочек. И в пробирку попадает минимальное количество зараженных клеток. Пить воду тоже не рекомендуется. Она смывает следы инфекции.

Для эффективной диагностики врачи советуют воздержаться от:

• чая;
• кофе;
• соков;
• любых горячих напитков.

Все эти вещества могут исказить результат ПЦР-теста.

Применение лекарственных средств

Категорически неприемлемо использование капель, спреев, антисептиков для горла и носа. Прием таблеток и лекарственных сиропов для лечения кашля следует исключить. Все они снижают количество вирусных частиц, что приводит к ложным результатам ПЦР-анализа.

Употребление алкоголя

За 24 часа до предполагаемого исследования следует отказаться от употребления любых алкогольных напитков. Содержащийся в алкоголе этанол (этиловый спирт 40-45%), полную дезинфекцию не даст, но общую картину испортит. Результат теста вряд ли будет достоверным.

Курение и ПЦР-тест

Табакокурение также приводит к тому, что тест на коронавирус становится неинформативным, и машина выдает неправильный результат ПЦР-исследования.

Гигиенические процедуры

К таким мероприятиям относится чистка зубов, полоскание горла и промывание носа. Если пациент хочет получить истинный результат теста на коронавирус, следует за несколько часов до забора биоматериала отказаться от гигиенических процедур. Также запрещается применять жевательную резинку в качестве очищающего средства ротовой полости.

Использование косметики

Перед ПЦР тестом можно применять косметические средства (губную помаду, блеск, бальзам). Мазок для анализа берется не изо рта, а из глотки (зева) и носа

Если соблюдается осторожность и не допускается соприкосновение губ и прибора для взятия мазка, то присутствие косметики не может помешать. Но если помада случайно смешивается с биологическими частицами, это может замедлить реакцию ПЦР

Лучше нанести косметические средства для губ после процедуры.

Как проходит забор материала на ПЦР-тест

Анализ на коронавирусную инфекцию COVID-19 – это исследование слизистых поверхностей ротовой и носовой полостей на присутствие вирусного возбудителя путем забора мазка.

Сама процедура быстрая, безболезненная, но немного неприятная. Проводится в амбулаторных условиях. В некоторых случаях специалист может выехать на дом к пациенту.

Медсестра специальной палочкой берет мазок из носовой полости и ротоглотки – зева. Вирус попадает на эпителии именно верхних дыхательных путей. И первые несколько дней живет в носу и в горле.

Биологический материал с задней стенки ротоглотки, дужек, неба, поверхности миндалин и из носоглотки считается самым информативным к моменту окончания инкубационного периода болезни. На 4-6 день присутствия ковидной инфекции в организме ПЦР-тест легко его обнаруживает.

После забора биоматериал помещается в стерильную емкость – контейнер и отправляется в лабораторию для расшифровки.

Эффективность процедуры

Обнаружение вируса у пациентов с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) свидетельствует о наличии активной инфекции и потенциально полезно для подтверждения диагноза и мониторинга антивирусного ответа на терапию.

Оптимальные анализы ПЦР в настоящее время имеют чувствительность менее 100 копий РНК ВГС на миллилитр плазмы или сыворотки

Стандартизация и проверка качества диагностических лабораторий, выполняющих ПЦР ВГС, остается важной проблемой для будущего исследования

Основными ограничениями текущих тестов являются неадекватный динамический диапазон, высокая вариабельность анализов на основе ПЦР и низкая чувствительность теста ДНК с разветвленной цепью. Молекулярные тесты также разработаны для классификации ВГС на отдельные генотипы.

Лучшие материалы месяца

• Коронавирусы: SARS-CoV-2 (COVID-19)
• Антибиотики для профилактики и лечения COVID-19: на сколько эффективны
• Самые распространенные «офисные» болезни
• Убивает ли водка коронавирус
• Как остаться живым на наших дорогах?

Проблема профессионального донорства крови и небезопасных методов инъекций является потенциальным источником заражения гепатитом С во всем мире. Все практикующие врачи должны понимать, как установить или исключить диагноз инфекции ВГС и правильно интерпретировать тесты.

В отсутствие профилактической или терапевтической вакцины, а также постконтактной профилактики против вируса, необходимо диагностировать инфекцию ВГС, чтобы предотвратить заражение и последующие осложнения, включая первичную гепатоцеллюлярную карциному.

Тем не менее очень многое зависит от самого пациента. Если человек замечает у себя хотя бы некоторые подозрения на инфицирование или ощущает определенные симптомы (хроническая усталость, сонливость, потеря сил) – необходимо обратиться к лечащему врачу за направлением на анализ ПЦР на гепатит С.

Источники

1. Малыш П. Н. с соавторами. Полимеразная цепная реакция в диагностике гемотрансмиссивных инфекций – Украинский журнал клинической и лабораторной медицины, т. 4, № 284, 2009, с. 121 – 123.

Больше свежей и актуальной информации о здоровье на нашем канале в Telegram. Подписывайтесь: https://t.me/foodandhealthru

Автор статьи:

Извозчикова Нина Владиславовна

Специальность: инфекционист, гастроэнтеролог, пульмонолог.

Общий стаж: 35 лет.

Образование: 1975-1982, 1ММИ, сан-гиг, высшая квалификация, врач-инфекционист.

Другие статьи автора

Редактор статьи:

Момот Валентина Яковлевна

Специальность: Онкология.

Место работы: Институт экспериментальной патологии, онкологии и радиобиологии им. Р. Е. Кавецкого НАН Украины.

Все отредактированные статьи редактора

Будем признательны, если воспользуетесь кнопочками:

Суть метода ПЦР

Полимеразная цепная реакция (ПЦР, PCR – polymerase chain reaction) – метод получения множества копий определенных фрагментов ДНК (генов) в биологическом образце.

Сущность ПЦР как метода молекулярной биологии заключается в многократном избирательном копировании определённого гена (участка ДНК) при помощи специальных ферментов в условиях in vitro

Важной особенностью ПЦР является получение копий конкретного участка ДНК (гена), соответствующего заданным условиям. Синонимом процесса копирования ДНК является «амплификация»

Репликация ДНК in vivo также может считаться амплификацией. Однако в отличие от репликации, в процессе полимеразной цепной реакции амплифицируются короткие участки ДНК (максимум 40 000 пар нуклеотидов).

Словарь терминов:

Внутренний контроль (внутренний контрольный образец, ВКО). Контрольный ген, который присутствует во всех образцах в выборке.Например, GAPDH, ACTB, TBP, HPRT, PPIA, YWHAZ.

Калибровочный образец. Калибровочным называют образец, по которому ведется сравнение полученных данных. Он представляет собой точку отсчета (time-zero). Значение RQ для контрольного образца равно 1, так как в таком случае он сравнивается с самим собой.

Ct = Пороговый цикл. Обычно ПЦР в реальном времени проходит в течение 40 циклов. Пороговый цикл наступает тогда, когда кривая амплификации пересекает линию порога чувствительности прибора (в месте, где график кривой амплификации становится линейным). Это значение необходимо для анализа. Чем выше значение порогового цикла (Ct=30-35), тем меньше мРНК находится в образце, так как нужно больше времени для амплификации необходимого для интенсивной флуоресценции количества копий мРНК. Если значение Ct невелико (10-15), это свидетельствует о том, что ген экспрессируется очень активно. Обычно внутренний контрольный образец имеет меньшее значение Ct, чем исследуемые гены.

Дельта Ct = Ct исследуемого гена – Ct внутреннего контрольного образца

Дельта Дельта Ct = ΔCt образца 1 – ΔCt калибровочного образца

Дельта Ct SD = Стандартное отклонение. Стандартное отклонение рассчитывается программным обеспечением по обработке данных анализа на основании значений Ct в трехкратном повторении. Данные достоверны, если Стд. откл. меньше 0,25. Если Стд. откл. Более 0,25, значению RQ доверять нельзя.

Реплики. Повторения (так называемые реплики) можно разделить на технические и биологические. Технической репликой является амплификация одного и того же материала, биологические реплики предполагают выделение мРНК и амплификацию из разного биологического материала.

RQ = Относительное количество = 2 – ΔΔCt. Значение RQ показывает количество продукта амплификации в технических репликах относительно калибровочного образца. Все образцы в рамках эксперимента будут сравниваться с калибровочным.

Например, если RQ=10, это значит, что в исследуемом образце экспрессия проходит в 10 раз более активно, чем в калибровочном. Значение RQ=0,1 говорит о том, что в исследуемом образце экспрессия проходит в 10 раз менее активно, чем в калибровочном.

Достоверными могут считаться данные, если RQ больше 2 или меньше 0,5. Это зависит от особенностей методики. Не исключено, что для одного и того же образца в один день можно получить значение RQ=0,8, а на следующий – 1,2. Если в ваших образцах предполагается малый разброс RQ (отличие в 1,5 раза от каибровочного образца), для анализа следует сделать биологические реплики образцов и они должны быть очень хорошо очищены. Кроме того, для каждого гена необходимо провести по 2 анализа и использовать ПКО с известным RQ.

RQmin и RQmax = диапазон возможных значений RQ с учетом стандартного отклонения ΔCt. Доверительный интервал должен быть 95%.Если вам необходимо узнать действительную ошибку RQ, следует делать трехкратные биологические реплики. Это позволит выполнить тест Стьюдента для различных групп повторений.